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Método de coloração de Gram

Desenvolvido pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (1853 - 1938) em 1884, o método de coloração Gram é um método de separação bacteriana, que consiste no tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com o reagente cristal violeta, lugol (solução de I2), etanol-acetona e fucsina básica.
hans christian joachim gram
Foto de Hand Christian Joachim Gram
Este método é um procedimento de coloração, que classifica as bactérias através da coloração em gram-positivo e gram-negativo. Sendo essa classificação baseada na capacidade das bactérias gram-positivas conseguirem reter o cristal violeta no citoplasma, enquanto as bactérias gram-negativas não conseguem o reter.
bacterias gram negativo positivo
As bactérias em rosa são Gram Negativo e as em roxo são Gram Positivo
Esse fenômeno ocorre porque quando o corante púrpuro e o iodo se combinam no citoplasma de cada bactéria, eles a coram de violeta escuro ou púrpuro. As Bactérias que conseguem reter essa cor após a aplicação do álcool são classificadas como grã-positivas; as bactérias que perdem a cor violeta escuro após a aplicação do álcool são classificadas como gram-negativas.

As bactérias gram-negativas ficam incolores após a lavagem com álcool, necessitando ser corada por algum corante. Nessa etapa é aplicada a safranina, corando as gram-negativas de rosa.

A safranina possui uma cor contracorante com a coloração primaria, sendo denominada contracorante. Como as bactérias gram-positivas retém a cor púrpura original, não são afetadas pelo contracorante safranina.

Esquema do que ocorre depois da aplicação de cada solução no método


Soluções em ordem de aplicação
Gram positivas
Gram negativas
    1-Cristal violeta - CV
Células coradas em violeta
Células coradas em violeta

          2-Solução de iodo (lugol) - I
Formação do complexo CV-I no interior das células, que permanecem violetas.
Formação do complexo CV-I no interior das células, que permanecem violetas.


    3- Álcool
     
Desidratação das paredes celulares, diminuição da porosidade e da permeabilidade: o complexo CV-I não pode sair das células que permanecem violetas.
Extração dos lipídios da parede celular, aumentando a porosidade: O complexo CV-I é removido das células.

    4- Safranina
As células não são afetadas, permanecendo violetas.
As células tomam o corante, tornando-se vermelhas.

Usos do Método de Gram


O método de Gram é um dos métodos de coloração mais utilizados em laboratórios de microbiologia e de análises clínicas, sendo quase sempre o primeiro passo para a caracterização de amostras de bactérias.

O método de gram fornece informações valiosas para o tratamento de uma doença. Pois dependo do tipo de bactéria, muda-se o tratamento.

Pois as bactérias gram-positivo tendem a ser mortas facilmente por penicilinas e falosporinas. Enquanto as bactérias gram-negativo são mais resistentes, pois os antibióticos não conseguem penetrar sua camada de lipopolissacarídeo.

Principais bactérias Gram-negativas

  • Escherichia coli 
  • Salmonella 
  • Shigella 
  • Enterobacteriaceae: 
  • Pseudomonas 
  • Moraxella 
  • Helicobacter 
  • Stenotrophomonas 
  • Bdellovibrio 
  • Legionella
  • Entre outras, como Chlorobi, Chloroflexi, Cianobactérias, Espiroquetas, etc.

Principais bactérias Gram-positivas

  • Filo Firmicutes (Bacilos,Estreptococos,Estafilococos, Enterococos, Actinobacteria, Listeria, etc).

Referências


Sobre o autor


Pedro Coelho Olá meu nome é Pedro Coelho, eu sou engenheiro químico, engenheiro de segurança do trabalho e Green Belt em Lean Six Sigma. Além disso, também sou técnico em informática, e em parte de minhas horas vagas me dedico a escrever artigos aqui no ENGQUIMICASANTOSSP, para ajudar estudantes de Engenharia Química e outros cursos. Se você acha legal esse projeto, siga-nos através de nossas paginas nas redes sociais e ajude-nos a divulgar essa ideia, compartilhando com seus amigos as nossas postagens.

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