Método de coloração de Gram

Desenvolvido pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (1853 - 1938) em 1884, o método de coloração Gram é um método de separação bacteriana, que consiste no tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com o reagente cristal violeta, lugol (solução de I₂), etanol-acetona e fucsina básica.

Foto de Hand Christian Joachim Gram

Este método é um procedimento de coloração, que classifica as bactérias através da coloração em gram-positivo e gram-negativo. Sendo essa classificação baseada na capacidade das bactérias gram-positivas conseguirem reter o cristal violeta no citoplasma, enquanto as bactérias gram-negativas não conseguem o reter.

As bactérias em rosa são Gram Negativo e as em roxo são Gram Positivo

Esse fenômeno ocorre porque quando o corante púrpuro e o iodo se combinam no citoplasma de cada bactéria, eles a coram de violeta escuro ou púrpuro. As Bactérias que conseguem reter essa cor após a aplicação do álcool são classificadas como grã-positivas; as bactérias que perdem a cor violeta escuro após a aplicação do álcool são classificadas como gram-negativas.

As bactérias gram-negativas ficam incolores após a lavagem com álcool, necessitando ser corada por algum corante. Nessa etapa é aplicada a safranina, corando as gram-negativas de rosa.

A safranina possue uma cor contracorante com a coloração primaria, sendo denominada contracorante. Como as bactérias gram-positivas retém a cor púrpura original, não são afetadas pelo contracorante safranina.

Esquema do que ocorre depois da aplicação de cada solução no método

Soluções em ordem de aplicação	Gram positivas	Gram negativas
1-Cristal violeta - CV	Células coradas em violeta	Células coradas em violeta
2-Solução de iodo (lugol) - I	Formação do complexo CV-I no interior das células, que permanecem violetas.	Formação do complexo CV-I no interior das células, que permanecem violetas.
3- Álcool	Desidratação das paredes celulares, diminuição da porosidade e da permeabilidade: o complexo CV-I não pode sair das células que permanecem violetas.	Extração dos lipídios da parede celular, aumentando a porosidade: O complexo CV-I é removido das células.
4- Safranina	As células não são afetadas, permanecendo violetas.	As células tomam o corante, tornando-se vermelhas.

Usos do Método de Gram

O método de Gram é um dos métodos de coloração mais utilizados em laboratórios de microbiologia e de análises clínicas, sendo quase sempre o primeiro passo para a caracterização de amostras de bactérias.

O método de gram fornece informações valiosas para o tratamento de uma doença. Pois dependo do tipo de bactéria, muda-se o tratamento.

Pois as bactérias gram-positivo tendem a ser mortas facilmente por penicilinas e falosporinas. Enquanto as bactérias gram-negativo são mais resistentes, pois os antibióticos não conseguem penetrar sua camada de lipopolissacarídeo.

Principais bactérias Gram-negativas

• Escherichia coli 
• Salmonella 
• Shigella 
• Enterobacteriaceae: 
• Pseudomonas 
• Moraxella 
• Helicobacter 
• Stenotrophomonas 
• Bdellovibrio 
• Legionella
• Entre outras, como Chlorobi, Chloroflexi, Cianobactérias, Espiroquetas, etc.

Principais bactérias Gram-positivas

• Filo Firmicutes (Bacilos,Estreptococos,Estafilococos, Enterococos, Actinobacteria, Listeria, etc).

Referências

• http://www.dec.ufcg.edu.br/biografias/HansChr1.html (Acessado em 13/09/2013 as 13:48) 
• http://www.infoescola.com/microbiologia/bacterias-gram-positivas-e-gram-negativas/ (Acessado em 13/09/2013 as 13:33) 
• http://www.icb.ufmg.br/mic/index.php?secao=material&material=19(Acessado em 14/09/2013 as 22:09)
• Microbiologia, Tortora GJ, Funke BR, Case CL, 8 º edição, editora Artmed. 
• Microbiology, Tortora GJ, Funke BR, Case CL, 11 º edição, editora Pearson.