Desenvolvido pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (1853 - 1938) em 1884, o método de coloração Gram é um método de separação bacteriana, que consiste no tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com o reagente cristal violeta, lugol (solução de I2), etanol-acetona e fucsina básica.
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Foto de Hand Christian Joachim Gram |
Este método é um procedimento de coloração, que classifica as bactérias através da coloração em gram-positivo e gram-negativo. Sendo essa classificação baseada na capacidade das bactérias gram-positivas conseguirem reter o cristal violeta no citoplasma, enquanto as bactérias gram-negativas não conseguem o reter.
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As bactérias em rosa são Gram Negativo e as em roxo são Gram Positivo |
Esse fenômeno ocorre porque quando o corante púrpuro e o iodo se combinam no citoplasma de cada bactéria, eles a coram de violeta escuro ou púrpuro. As Bactérias que conseguem reter essa cor após a aplicação do álcool são classificadas como grã-positivas; as bactérias que perdem a cor violeta escuro após a aplicação do álcool são classificadas como gram-negativas.
As bactérias gram-negativas ficam incolores após a lavagem com álcool, necessitando ser corada por algum corante. Nessa etapa é aplicada a safranina, corando as gram-negativas de rosa.
A safranina possui uma cor contracorante com a coloração primaria, sendo denominada contracorante. Como as bactérias gram-positivas retém a cor púrpura original, não são afetadas pelo contracorante safranina.
Esquema do que ocorre depois da aplicação de cada solução no método
Soluções em
ordem de aplicação
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Gram positivas
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Gram negativas
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1-Cristal violeta - CV
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Células coradas em violeta
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Células coradas em violeta
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2-Solução de iodo (lugol) - I
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Formação do complexo CV-I no interior das
células, que permanecem violetas.
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Formação do complexo CV-I no interior das
células, que permanecem violetas.
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3- Álcool
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Desidratação das paredes celulares, diminuição da
porosidade e da permeabilidade: o complexo CV-I não pode sair das células que
permanecem violetas.
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Extração dos lipídios da parede celular,
aumentando a porosidade: O complexo CV-I é removido das células.
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4-
Safranina
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As células não são afetadas, permanecendo
violetas.
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As células tomam o corante, tornando-se
vermelhas.
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Usos do Método de Gram
O método de Gram é um dos métodos
de coloração mais utilizados em laboratórios de microbiologia e de análises
clínicas, sendo quase sempre o primeiro passo para a caracterização de amostras
de bactérias.
O método de gram fornece informações valiosas para o tratamento de uma doença. Pois dependo do tipo de bactéria, muda-se o tratamento.
Pois as bactérias gram-positivo tendem a ser mortas facilmente por penicilinas e falosporinas. Enquanto as bactérias gram-negativo são mais resistentes, pois os antibióticos não conseguem penetrar sua camada de lipopolissacarídeo.
Principais bactérias Gram-negativas
- Escherichia coli
- Salmonella
- Shigella
- Enterobacteriaceae:
- Pseudomonas
- Moraxella
- Helicobacter
- Stenotrophomonas
- Bdellovibrio
- Legionella
- Entre outras, como Chlorobi, Chloroflexi, Cianobactérias, Espiroquetas, etc.
Principais bactérias Gram-positivas
- Filo Firmicutes (Bacilos,Estreptococos,Estafilococos, Enterococos, Actinobacteria, Listeria, etc).
Referências
- http://www.dec.ufcg.edu.br/biografias/HansChr1.html (Acessado em 13/09/2013 as 13:48)
- http://www.infoescola.com/microbiologia/bacterias-gram-positivas-e-gram-negativas/ (Acessado em 13/09/2013 as 13:33)
- http://www.icb.ufmg.br/mic/index.php?secao=material&material=19(Acessado em 14/09/2013 as 22:09)
- Microbiologia, Tortora GJ, Funke BR, Case CL, 8 º edição, editora Artmed.
- Microbiology, Tortora GJ, Funke BR, Case CL, 11 º edição, editora Pearson.
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